探针法猪肺炎支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Hyopneumoniae

货号：Mqt-hpn-20      规格：20个反应

货号：Mqt-hpn-50      规格：50个反应

货号：Mqt-hpn-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，   特异性检测猪肺炎支原体，与其他生物基因组无交叉反应。

2，   灵敏度高，最低检测极限为反应液中2.5个基因组。

3，   使用热启动的Taq酶，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，   带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，   带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

猪肺炎支原体（Mycoplasma Hyopneumoniae）是地方性猪肺炎的主要病原体。猪猪肺炎支原体附着于猪肺上皮细胞的纤毛上，导致纤毛停滞、结块和丢失，最终导致上皮细胞死亡，这是猪肺部损伤病变的原因。这种损害妨碍正常的纤毛清除，并且经常引发继发性感染。猪对猪肺炎支原体的免疫应答缓慢且无效。这种支原体不产生任何特别有害的毒素，但是可观察到一些毒性很小的代谢副产品。肺炎支原体会造成猪发育迟缓，食物转化不良，干咳，对其他生物感染的易感性增加。

对猪肺炎支原体的检测，常采用体外培养法和免疫荧光法。由于猪肺炎支原体生长条件非常挑剔，这两种检测方法有时需要一个月才能完成。由于生长很慢，其他支原体，尤其是猪鼻支原体（Mycoplasma Hyorhinis），常对猪肺炎支原体的培养造成污染，因此培养法很少使用。由于猪免疫系统应答缓慢，血清学检测方法往往无效，而且会与猪鼻支原体和絮状支原体(Mycoplasma flocculare)产生交叉反应。使用PCR法检测，具有更高的灵敏度和特异性，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。普通PCR实验操作较为繁琐，只能对目标DNA进行定性分析，相比之下，实时定量PCR不仅可以对目标DNA进行定量分析，实验步骤也较为简单，且灵敏度更高，更少受环境污染的影响。

探针法猪肺炎支原体定量PCR试剂盒选取一个粘附蛋白基因作为靶点，经BLAST验证，特异性靶向猪肺炎支原体，与其他生物基因组无交叉反应。使用本试剂盒检测了亲缘关系或分布范围较近的11种支原体和10种细菌，只有猪肺炎支原体可以产生特异性信号，其余均无交叉反应发生。对猪肺炎支原体接种28天后的52个呼吸道拭子和灌洗液样品进行检测，得到51个阳性。本试剂盒适用于猪肺炎支原体的检测和鉴定。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP可以阻止前次步骤残余DNA的扩增。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基，从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为下几轮PCR的模板。在PCR循环开始前的UDG孵育步骤，可以破坏带有尿嘧啶的PCR产物。经过该去除污染步骤后，UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活，对PCR反应没有影响。