试剂盒组成

1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶

2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  阳性对照  0.5ml×1 瓶

3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  阴性对照  0.5ml×1 瓶

4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份

5  显色剂 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 张

6  显色剂 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个

标本 要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.  编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.  加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.  温育：操作同 3。

8.  洗涤：操作同 5。

9.  显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结 ：

计算和结果判定 ：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为脊髓灰质炎病毒(PV)阴性

阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为脊髓灰质炎病毒(PV)阳性

。

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6 个月