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线粒体呼吸链复合物II检测试剂盒(琥珀酸-辅酶Q还原酶)(比色法)
线粒体呼吸链复合物II检测试剂盒(琥珀酸-辅酶Q还原酶)(比色法)图片
货号:A089-2-1
参考价格:2790元/盒
包装:20管/20样


产品名称
Electron transport chain Complex II assay kit
线粒体呼吸链复合物II试剂盒(琥珀酸-辅酶Q还原酶)
产品介绍

        线粒体呼吸链复合物II,通常称为琥珀酸-辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶(Succinate-Coenzyme Q Reductase;Succinate Dehydrogenase),是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体:含有四个亚单位,包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide;FAD)和三个铁硫中心(Fe-S clusters),以及细胞色素b亚单位,其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸-辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化为富马酸(fumarate),线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤(paraganglioma)、肾上腺嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)和Leigh综合征。基于琥珀酸底物,通过琥珀酸-辅酶Q还原酶的催化,氧化为富马酸,同时氧化型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIP)转化为还原型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIPH2),在分光光度仪下产生吸光峰值的变化(600nm 波长),由此定量测定琥珀酸-辅酶Q还原酶的特异活性。

试剂组成:(20 管/10 样))
       缓冲液(Reagent A) 20 毫升
       反应液(Reagent B) 2.5 毫升
       阴性液(Reagent C) 2 毫升
       底物液(Reagent D) 500 微升
       产品说明书 1 份

保存方式
       -20°C冰箱保存,避免反复冻融;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D),避免光照,有效期6月。

用户自备
       比色皿:用于比色分析的容器
       双波长分光光度仪:用于比色分析
      培养箱:用于孵育反应物

实验步骤
       实验开始前,将-20°C冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;缓冲液(Reagent A)室温预热;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
      (一)、背景对照测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、上下倾倒数次,混匀
5、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
6、加入 100 微升阴性液(Reagent C)
7、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:
600 波长读数 0 分钟-600 波长读数 1 分钟或 5 分钟
      (二)、样品活性测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、上下倾倒数次,混匀
5、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
6、加入 100 微升待测样品(注意:10微克总线粒体蛋白)
7、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8、即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:
600 波长读数 0 分钟-600 波长读数 1 分钟或 5 分钟

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