海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。

测定方法采用蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果样本中含有可溶性糖，则会影响测定。本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。

技术指标：

最低检出限：0.0055mg/ml

线性范围：0.00625-0.4mg/ml

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1.标准品：10mg海藻糖，临用前加1ml蒸馏水，溶液浓度为10mg/ml；

2.工作液的配制：临用前在试剂一中加入7ml蒸馏水后，缓慢加入28ml浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。用不完的试剂4℃保存一周。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、浓硫酸和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次)，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。

2.组织的处理：称取约0.1g样本，加入1ml提取液，冰浴匀浆或研碎，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。

3.血清(浆)的处理：吸取约100μL血清(浆)，加入0.9ml提取液，充分混匀，室温静置45min，振荡3～5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。

二、测定操作

1.分光光度计或酶标仪预热30min，波长调节至620nm，蒸馏水调零。

2.调节水浴锅至95℃。

3.标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.2、0.1、0.075、0.05、0.025、0.0125、0mg/ml。

4.标准曲线的建立：取60μL标准液和240μL现配的工作液混匀，95℃水浴10min，(盖紧，防止水分散失)自然冷却至室温，取200μL至比色皿或96孔板中，在620nm处测吸光值A。根据标准样本的浓度(x)和吸光度(y)建立标准曲线。

5.样本测定：取60μL样本和240μL现配的工作液混匀，95℃水浴10min，(盖紧，防止水分散失)自然冷却至室温，取200μL至比色皿或96孔板中，在620nm处测定吸光度值为A。

三、海藻糖含量计算

1.根据标准曲线计算样本中海藻糖的含量x(mg/ml)。

2.按样本质量计算：海藻糖含量(mg/g质量)=V₁×x÷(W×V₁÷V₂)=x÷W

3.按样本蛋白浓度计算：海藻糖含量(mg/mg prot)=V₁×x÷(V₁×Cpr)=x÷Cpr

4.按细菌或细胞数量计算：海藻糖含量(μg/10⁴cell)=1000×V₁×x÷(500×V₁÷V₂)=2x

5.血清(浆)海藻糖含量计算：海藻糖含量(mg/ml)＝V₁×x÷(V₃×V₁÷V2)=10x

V₁:反应体系中样本体积，0.06ml；V2：提取液总体积，1ml；V₃：血清、血浆体积，0.1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；1000:单位换算系数，1mg/ml=1000ug/ml。

注意事项：如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。