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基于酵母细胞表面展示技术的抗体开发技术优化
2024.06.10   点击17次

酵母细胞表面展示(Yeast cell surface display,YSD)技术已被广泛应用于各种蛋白质(包括酶、各类抗体(包括但不限于VHH、scFv、Fab等))的设计、展示、筛选和定向进化研究,尤其是重要靶点的候选分子发现。相比于噬菌体展示技术,基于酵母表面展示技术展示的目标分子更能保持天然的空间构象和活性,满足优质功能性抗体(例如:阻断型抗体、中和抗体等)开发的需求,是各类药物靶点抗体开发的重要工具。

很多研究均将抗体等目标小分子设计在Aga2p的C端融合到酿酒酵母中,通过酵母展示和流式细胞分析筛选特异性亲和抗体。Uchański等人提出了一种改进的酵母展示系统,用于纳米抗体免疫文库筛选,即将纳米抗体融合到Aga2p的N端以避免纳米抗体与抗原之间的空间位阻,且展示的纳米抗体很容易地从酵母表面释放出来并固定在酵母表面上。此外,单克隆纳米抗体在单个酵母细胞表面的展示水平可以通过一个共价的荧光团监测,该荧光团在单一酶促步骤中附着在正交酰基载体蛋白(ACP)上。该新型酵母展示平台验证了三种不同抗原(包括一种可溶性蛋白和两种膜蛋白)的纳米抗体筛选,以证明了该体系的普遍性,为未来药物靶点(尤其是膜蛋白靶点)候选分子的发现提供了思路。

该研究开发了一个酵母展示改进的平台,通过酵母表面展示和流式细胞分析来筛选亲和抗体。通过将目标抗体构建到Aga2p的N端融合以使CDRs完全暴露便于流式筛选过程中抗原的结合,并实施表面展示正交标记,实现抗体展示及筛选与表面展示表达验证互不干扰,能够稳定地监测每个酵母克隆的展示水平。

未来该方法对于各类靶点的纳米抗体、scFv抗体及Fab抗体等的表面展示和筛选,尤其是膜蛋白亲和抗体的筛选将是一种重要的手段和策略,为未来越来越多的药物靶点抗体的发现提供思路,加快优质功能性抗体药物的发现过程。


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