基本信息

产品描述

Ponatinib (AP24534)是一种新型有效的多靶点抑制剂，在无细胞试验中作用于Abl，PDGFRα，VEGFR2，FGFR1和Src，IC50分别为0.37 nM，1.1 nM，1.5 nM，2.2 nM和5.4 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Abl,0.37 nM (cell free)

c-Kit,12.5nM

c-Src,5.4 nM (cell free)

FGFR1,2.2 nM (cell free)

PDGFRα,1.1 nM (cell free)

VEGFR2,1.5 nM (cell free)

LYN,0.24 nM (cell free)

体外研究

Ponatinib是有效的可用于口服的多靶点激酶抑制剂，作用于野生型细胞,及T315I 突变细胞IC50分别为1.2和8.8nM。[1] Ponatinib抑制Ba/F3衍生细胞系的增殖。[2] Ponatinib作用于表达野生型或T315I突变型BCR-ABL的CML细胞系，有效抑制BCR-ABL调节的信号。Ponatinib阻断在细胞瘤筛选时产生抗性突变。[3] Ponatinib也抑制VEGFR和FGFR家族激酶，在体外抑制FLT3, KIT, FGFR1,和PDGFRa激酶活性时IC50分别为13, 13, 2, 和1 nM.[4]Ponatinib抑制全部4种RTKs磷酸化，存在剂量依赖性，IC50值为0.3到20 nM。然而，Ponatinib抑制表达野生型FLT3的RS4;11细胞时IC50>100 nM。

体内研究

Ponatinib抑制取自FLT3-ITD阳性AML病人的原代白血病细胞，而不抑制表达阴性FLT3的AML病人的白血病细胞。[3]

激酶实验

激酶实验:

通过同质时间分辨荧光共振能量转移法(TR-FRET)，使用纯化的人类野生型ABL激酶，T315I突变型ABL激酶，及生物素化的磷酸激酶底物肽: 生物素-EKKMAAEAIYAAPFAK-NH2，测定野生型ABL和T315I突变型ABL活性的抑制激酶反应在全LANCE激酶buffer (LKB)中进行，LKB包括20 mM NaHEPES（pH 为7.4）, 0.1 mg ⁄ mL BSA, 1 mM ATP, 10 mM MgCl2, 及0.41 mM DTT，在提前用1% BSA（溶于PBS）包被的96孔板上4oC下过夜。用于激酶反应，Ponatinib稀释物和野生型ABL, T315I突变型ABL (40 pM), 及底物肽(50 nM), 在室温下温育1小时（T315I突变型ABL）或2小时（野生型ABL）。加入15 nM 抑制剂, 6 nM 铕标记的磷酸酪氨酸抗体（磷酸化位点在第66为酪氨酸上），及60 nM 别藻蓝素标记的链酶亲和素，终止反应。实验板在室温下黑暗温育20分钟，使用Wallac Victor2V读数器读取615和665nm处的荧光值。在孔中数据平均值中插入抑制剂的3倍连续稀释液，再读取665nm处荧光值，计算IC50值。

细胞实验

Cell lines: Ba ⁄ F3细胞

Concentrations: 0-625 nM, 和0-10 µM

Incubation Time: 72小时

Method: Ba/F3细胞系按每孔4×103个细胞分布在96孔板上(4×103)，和梯度浓度Ponatinib温育72小时。Ponatinib浓度范围为: 0-625 nM 作用于表达BCR-ABL细胞，0-10 µM 用于测定BCR-ABL阴性细胞。使用MTS实验测定细胞增殖，取三次平行实验平均值测定IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 皮下植入MV4-11细胞移植瘤(1×107，50%基质胶中) 的雌性CB.17 SCID鼠

Formulation: 25 mmol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 为2.75)

Dosages: 每天处理一次，持续4周

Administration: 口服饲喂处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] O'Hare T, et al. Cancer Cell, 2009, 16(5), 401-412.

[2] Huang WS, et al. J Med Chem, 2010, 53(12), 4701-4719.

[3] Gozgit JM, et al. Mol Cancer Ther, 2011, 10(6), 1028-1035.

[4] Gozgit JM, et al. Mol Cancer Ther, 2012, doi: 10.1158/1535-7163. Epub ahead of print

[5] O'Hare T, et al. Blood, 2004, 104(8), 2532-2539.