基本信息

产品描述

Geldanamycin是一种天然的HSP90抑制剂，Kd为1.2 μM，特异性干扰糖皮质激素受体（GR）/HSP联合。

靶点（IC50 & Targe）

HSP90,1.2μM(Kd)

p185,70nM

体外研究

Geldanamycin结合于Hsp90s (残基1-220) N-末端结构域的ATP结合位点。Geldanamycin剂量依赖性抑制Hsp90的ATPase活性。[1] 在A2780人卵巢细胞系中，Geldanamycin引起剂量依赖性G2期阻滞，并可逆抑制其进入S期。该抑制作用伴随p53的增加，最终证明是p53依赖性的。[2] Geldanamycin引起p185受体蛋白-酪氨酸激酶的泛素化和蛋白酶体降解，IC50为70 nM。[3, 4] Geldanamycin是典型的抗肿瘤试剂，对一组60个人肿瘤细胞系的平均GI50为0.18 μM。[5]

体内研究

在FRE/erbB-2 小鼠体内，Geldanamycin (50 mg//kg)对pl85-相关的磷酸酪氨酸水平表现出30%的抑制。[6]

激酶实验

核苷结合的等温滴定量热法(ITC):

滴定实验使用MSC系统进行。在每个实验中，16等份15 μL geldanamycin (300 μM在1% DMSO中)在25 °C下注射到1.3 mL蛋白质(31 μM在20 mMTris-HCl中, pH 7.5, 1 mMEDTA)，得到的数据减去稀释热后进行拟合。将geldanamycin加入缓冲液和缓冲液加入蛋白质的稀释热在单独实验中测定。在核苷酸结合位点没有观察到DMSO的结合。滴定数据使用非线性最小二乘法曲线拟合算法拟合，该算法有三个不固定变量：化学计量，结合常数(Kb) 1/Kd)，和相互作用焓的变化(ΔH°)。Geldanamycin结合到完整酵母Hsp90和Hsp90 N-末端结构域，估计的解离常数分别为1.22 μM和0.78 μM。结合到C-末端片段时，没有观察到有意义的热量。

细胞实验

Cell lines: A2780人卵巢癌细胞系

Concentrations: 0.001-10 μM

Incubation Time: 3小时

Method: 指数生长的细胞用Geldanamycin处理，不同时期的DNA合成通过溴脱氧尿苷(BrdUrd)的整合和流式细胞分析术评估。在此期间，处理的和未处理的细胞，总细胞数没有显著的差别。BrdUrd (10 μM)在37 °C下4小时的培育期间进行整合，将细胞采集并固定在70%乙醇中。DNA通过2 N HC1变性后，细胞用抗- BrdUrd小鼠单克隆抗体培育，随后用异硫氰酸荧光素(FITC)-连接的山羊抗-小鼠IgG培育。细胞在室温下用碘化丙啶着色30分钟，使用Coulter EPICS Profile分析器通过流式细胞术分析。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 负荷FRE/erbB-2肿瘤的nu/nu小鼠

Formulation: Geldanamycin溶于DMSO。

Dosages: 50 mg/kg

Administration: 通过腹腔注射给药

(Only for Reference)

参考文献

[1] Roe SM, et al, J Med Chem, 1999, 42(2), 260-266.

[2] Mcllwrath AJ, et al, Cancer Chemother Pharmacol, 1996, 37(5), 423-428.

[3] Mimnaugh EG, et al, J Biol Chem 1996, 271(37), 22796-22801.

[4] Miller P, et al, Cancer Res, 1994, 54(10), 2724-2730.

[5] Supko JG, et al, Cancer Chemother Pharmacol, 1995, 36(4), 305-315.

[6] Schnur RC, et al. J Med Chem, 1995, 38(19), 3806-3812.

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