基本信息

一般描述

传统的核酸与抗体连接方式主要依靠化学偶联剂的修饰再连接，如将抗体Fc端的糖链进行叠氮化，再与5'端DBCO修饰的核酸进行偶联反应，完成核酸与抗体的连接。此方法可控制偶联位置，但碱基修饰和其他纯化步骤成本高，且很难控制偶联数量。AND linker是一种双功能融合蛋白，包含两个功能域（图1）：

1. 特异性单链DNA（Single-stranded DNA，ssDNA）连接域，可与序列5'-AAGTATTACCAGAAA-3'（下划线处为切割结合位点）发生共价结合（与切割后5'-磷酸基团反应）；
2. 特异性抗体Fc端连接域，可与Fc端稳定偶联，最终形成化学计量比为1: 1的抗体-单链DNA缀合物（图2）。

图1 AND linker包含两个功能结构域

图2 目标抗体与ssDNA的1: 1定量偶连

优势和特点：

• 无需修饰ssDNA链，稳定共价连接；
• 反应体系稳定；
• 1h高效反应；
• 与抗体Fc端特异性连接；
• 精准控制抗体-DNA连接化学计量比为1: 1。

应用

可用于免疫PCR（Immuno-PCR）蛋白互作的邻近连接分析（Proximity Ligation Assay, PLA）等研究。

参考文献

1. Qiongqiong Wan, Yanchao Song, Zhao Li, Xinghui Gao and Huimin Ma*. In vivo monitoring of hydrogen sulfide using a cresyl violet-based ratiometric fluorescence probe. Chem. Commun. 2013, 49, 502-504.

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