髓过氧化物酶中性粒细胞所特有,即使在有强吞噬作用的世噬细胞中也极少或完全没有这种酶作为中性粒细胞得到标志。其功能为将氯氧化物和氧化氢转变为次氯盐酸。在炎症状态下,它被释入细胞外液,进入循环。此酶参与含LDL的脂类氧化。
测定原理:
中性白细胞中存在有髓过氧化物酶,每个细胞所含的酶的量是一定的,约占细胞干重的 5%,该酶具有使过氧化氢还原的能力,利用这一特点可以分析酶的活力,并定量测定中性白细胞的数目。其原理如下:
MPO+H2O2 ---->复合物; 复合物+AH2(供氢体)----> H2O+MPO+A 产物
通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物,在 460nm 处通过比色测定 A 产物的生成量,从而推算出 MPO 的活力及 H2O2 减少的量和白细胞的数目。
产品优点如下:
1、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
2、再现性好:变异系数CV=1.3%。
3、回收试验: X =104%。
4、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
5、测试面广:可测各种动物血清(浆)、组织,效果均佳。
试剂组成与配制:(100T/48 样)
试剂一:缓冲贮备液 35ml×1 瓶,按需要量配成缓冲应用液,4°C保存 6 个月。
缓冲应用液的配制:贮备液:双蒸水=1:9,4°C保存 1 个月。
试剂二:粉剂×2 支,4°C保存 6 个月。临用时每支加缓冲应用液 60ml 溶解,可以 37°C加热溶解, 4°C保存 2 周。
[注]:若所需测的是组织样本,并且除髓过氧化物酶之外,还需测其它项目时,此时每支试剂二粉剂需配成浓缩一倍的溶液,即每支试剂二粉剂加到缓冲应用液 30ml中。
试剂三:粉剂×3 支,溶剂 6ml×3 支,4°C保存 6 个月。用时 1 支粉剂倒入 1 支溶剂中溶解,**提前一天配制,充分溶解后 4°C保存 2 周。
试剂四:溶液 24ml×1 瓶,天冷时会凝固,用前放入 37°C以上的水中摇晃使其溶解至透明后方可应用,室温保存 6 个月。
试剂五:粉剂×2 支, 4°C保存 6 个月。
试剂六:溶液 0.5ml×1 支,4°C保存 6 个月。
显色剂的配制:临用时将试剂五粉剂 1 支加到 100ml 缓冲应用液中,充分摇匀,待粉剂完全溶解后再加入试剂六 0.1ml,充分混匀,配好后的显色剂 4°C避光保存。
试剂七:溶液 6ml×1 瓶,4°C保存 6 个月。
所需仪器及自备试剂:
1、可见分光光度计(比色测定波长为460nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃和60℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入样本和R2、R3,37℃水浴15分钟
2、取以上混合液加入R4和显色剂,37℃水浴30分钟
3、加入R7,60℃水浴10分钟,460nm波长,1cm光径,比色