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γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(比色法)
γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(比色法)图片
货号:A120-1-1
参考价格:598元/盒
包装:50T/24样


产品名称
γ- glutamylcysteine ligase (GCL) test kit
γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶测试盒(比色法)
产品介绍

测定原理:
       在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时ATP分解产生无机磷,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。

自备仪器用品:
       低温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、浓硫酸、蒸馏水

试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4°C保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4°C保存,临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解;
试剂三:粉剂×1 瓶,4°C保存,临用前加3.5mL蒸馏水充分震荡溶解;
试剂四:液体×1 瓶,室温保存;
试剂五:粉剂×1 瓶,4°C保存,临用前加30mL蒸馏水充分震荡溶解,缓缓加入1.0mL浓硫酸,边加边搅拌。

样品前处理:
       样本粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。

GCL测定步骤
1. 分光光度计预热30min 以上,调节波长到660nm,用蒸馏水调零;
2. 空白管:
(1)依次加入双蒸水120μL、试剂一240μL、试剂二260μL和试剂三60μL,混匀后盖紧,37°C水浴准确反应15分钟;
(2)加入试剂四300μL,混匀后,室温(25°C左右)下10000rpm离心10分钟,取上清500μL待测;
(3)加入试剂五500μL,混匀后盖紧,45°C水浴10分钟,冷却后测定660nm处吸光率,对大量样品,空白管只需做1-2个。
3. 测定管:
(1)依次加入试剂一240μL、试剂二260μL、试剂三60μL和前处理样品上清120μL,混匀后盖紧,37°C水浴准确反应15分钟;
(2)加入试剂四300μL,混匀后,室温(25°C左右)下10000rpm离心10分钟,取上清500μL待测;
(3)加入试剂五500μL,混匀后盖紧,45°C水浴10分钟,冷却后测定660nm处吸光率,计算△A=A测定管-A空白管。
注:吸光率需在水浴完成后尽快测定完成。

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